基于转录组学和蛋白质组学的高海拔肺动脉压缩空气大鼠模型的新靶点

冠状动脉高热（PH）是同义静息时平均冠状动脉压≥25 mmHg。 它根据血流动力精研特征、肺癌组态和病理学精研分为五类。 第三类高山冠状动脉高热（HAPH）是由于在高山诱发生态环境之中肺换气量代偿开放性增加和肺小动脉血管扩张引起的，导致高原心肌病。 临床病症包括运动开放性痉挛、头痛和疲劳。 HAPH 意味著反映了未能适应以高山，并伴有不可信的病理学生理组态。 大约有 1.4 亿人贫困在山区 2,500 米以上的内陆地区，每年有超过 4,000 万人采访这些高山内陆地区。 诱发导致脑部基因组表达谱发生关联开放性波动； 这比如说经常开放性聚居在高山内陆地区的村民及其后代的基因组型适应以开放性波动之中得知的。HAPH 的治疗法仍在研究成果之中。应以建议患者移至低山区内陆地区，硫疗直接。类固醇治疗法的研究成果以外一些随机试制。 HAPH 的病理学与其他类型的 PH 近似于，因此没人考虑对 PAH 直接的类固醇是否对 HAPH 直接。

然而，所有这些核酸类固醇都在HAPH之中的直接开放性和组态尚不可信。为了解到决这个疑问，我们力图研究成果诱发所相关的分子会组态，应用于鼠类 HAPH 建模，并应以用区域性多三组精研方法。 在此处理过程之中，我们力图研究成果几种核酸类固醇和复硫的发挥作用，以确定高山引起的诱发的潜在新治疗法机理。 特别是，我们研究成果了核酸类固醇如何影响脑部中间的关联开放性基因组和蛋白质表达。

研究成果设计：

将鼠类置于 10% O2（诱发）寝室之中 3 都于激发 PH。对照鼠类（C 三组）在整个实验之中都保持稳定常硫生态环境下，并在治疗法期间（即从第 21 天开始）用适配顺利进行治疗法。 3周时，其余鼠类随机分为六三组；一三组被诛杀（第 21 天）以指标心肺功能。其余 5 三组用核酸类固醇或复硫治疗法，从第 21 天到第 35 天诛杀。慢开放性诱发，适配处理（M）；慢开放性诱发，司来帕格治疗法；慢开放性诱发，贝尔替坦治疗法；慢开放性诱发，riociguat 治疗法；慢开放性诱发、复硫 (RE)。

mRNA三组归纳：

提取总 RNA，并通过应用于 Arraystar rRNA Removal Kit 去除 rRNA 来富集 mRNA 和非编码 RNA。 mRNA 和非编码 RNA 被片段化缓冲液分解成首集段（~200-500 nt）。以首集段为模板，利用随机六聚体引物催化第一链cDNA。在第二链催化处理过程之中，dTTP 被 dUTP 取代。 然后加入洗脱缓冲液以通过前端修缮和添加腺嘌呤来纯化和分离首集段。 首集段被纯化并与连接器连接； 应用于巯基-N-糖基化复合物消化第二条链。 琼脂糖GC后，选择合适的片段作为模板顺利进行PCR扩增。 应用于 Agilent 2100 生物归纳仪和 ABI StepOnePlus 实时 PCR 一个系统探头坎顺利进行定量分析和质量指标。 该文坎应用于 Illumina HiSeq 2000 系统顺利进行测序。

LC-MS/MS 归纳

在连接到 Easy-nLC 1000 液相色谱系统的Q Exactive HF 质谱仪上归纳探头。将潮湿的肽探头重新溶解在盐酸 A（0.1% 吡啶水溶液）之中并加载到捕集柱之中应用于盐酸 A 的小得多压力为 280 bar，然后在自制的 150 μm × 30 cm 硅胶微柱上以 5–35% 的梯度顺利进行分离流动相 B（乙腈和 0.1% 吡啶），流速为 600 nl/min，持续 150 分钟。 QE HF 的 MS 归纳是在 3e6 阴离子的自动增益控制目标下顺利进行一次全扫描，然后顺利进行多达 30 次与原始数据相关的 MS/MS 扫描具备更高光能的碰撞解离，在 Orbitrap 之中扫描到（R = 15,000 在 200 m/z）。

研究成果结果：

基于RNA-seq原始数据的共表达互联的功能富集归纳和交汇点分子会确认。

基于蛋白质原始数据的共表达互联的功能富集归纳和交汇点分子会确认。

RNA-seq 和蛋白质三组精研揭示了对三种类固醇的加成以中间的极强相关开放性，具备差不多相同的效果。GO 富集推断关联开放性表达的基因组包括直接参与生物催化调节、mRNA和译文的基因组。

司来帕格、贝尔替坦和复硫可增加 HAPH。Serpina1、Cryz 和 Cmc1 被确认出来，通过多三组精研筛选，作为直接参与HAPH的这两项基因组。这些见到为 HAPH 的核酸类固醇组态提供了更进一步见解。

研究成果结论：

Selexipag、macitentan 和复硫显着减弱了鼠类 HAPH 建模，而 riociguat 的发挥作用较弱。 关联开放性表达的基因组直接参与生物催化调控、mRNA和译文。 某些蛋白质受到 HAPH 和治疗法的影响。 我们应用于多三组精研方法筛选了这两项基因组 Serpina1、Cryz 和 Cmc1。 这些见到意味著有效地很好地了解到诱发所相关的分子会组态，并意味著提供更进一步治疗法机理。

手抄本引自：

Xu X, Li H, Wei Q, Li X, Shen Y, Guo G, Chen Y, He K, Liu C. Novel Targets in a High-Altitude Pulmonary Hypertension Rat Model Based on RNA-seq and Proteomics. Front Med (Lausanne). 2021 Nov 3;8:742436. doi: 10.3389/fmed.2021.742436. PMID: 34805208; PMCID: PMC8595261.